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IHC出現假陽性、假陰性等問題該怎么辦?

更新時間:2024-11-13點擊次數:960

?免疫組化(IHC)實驗中出現假陽性和假陰性了怎么辦呢?


一、假陽性的處理

1. ?降低一抗濃度?:通過降低一抗的濃度,可以減少非特異性結合,從而降低假陽性。通常,降低濃度至能看到陽性表達且能明顯區分陽性區域與周圍間質即可?

2. ?調整封閉條件?:逐步提高封閉條件,從山羊血清到5%BSA+山羊血清,最終至5%脫脂奶。通常調整至5%BSA+山羊血清即可,不建議輕易使用5%脫脂奶?

3. ?選擇合適的二抗?:對于動物標本,選擇抗鼠或抗兔的二抗,避免使用通用型二抗,以免種屬間抗原抗體反應引起假陽性?

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二、假陰性的處理

?抗原修復?通過抗原修復技術可以增加抗原的暴露,從而提高檢測的靈敏度,減少假陰性?

三、實驗操作中的常見問題及解決方法

1. ?個體差異?:個體差異可能導致某些人的體內存在與抗體相似的物質,從而導致假陽性。通過多次重復實驗和嚴格控制實驗條件可以減少這種影響?

2. ?實驗操作誤差?:樣本污染、操作不規范等可能導致假陽性。嚴格遵守實驗操作規程,確保樣本的純凈和操作的準確性可以有效減少這種誤差?

3. ?試劑質量?:試劑的質量不穩定或過期也可能影響檢測的準確性。使用高質量、在有效期內的試劑,并嚴格按照說明書操作可以減少這種影響?


通過以上方法,可以有效減少免疫組化實驗中的假陽性和假陰性問題,提高實驗結果的準確性和可靠性。

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