美天旎的磁珠分選技術(shù)非常成熟和高效。其核心步驟標(biāo)準(zhǔn)化程度高，主要分為陽性分選和陰性分選。以下為您詳細(xì)解析 MACS® 技術(shù)操作步驟，以從單個(gè)細(xì)胞懸液中陽性分選特定細(xì)胞類型為例。整個(gè)過程快速、溫和，通常在1-2小時(shí)內(nèi)即可完成。

一、美天旎磁珠分選第一步：實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備

1.  樣本：制備好高質(zhì)量的單細(xì)胞懸液（如從血液、脾臟、腫瘤組織中獲取，并經(jīng)細(xì)胞篩過濾去除團(tuán)塊）。

2.  試劑：

       美天旎磁珠：針對您目標(biāo)細(xì)胞表面標(biāo)志物的熒光抗體-磁珠復(fù)合物。

       MACS® 分選緩沖液：通常是含EDTA的PBS+胎牛血清。至關(guān)重要，用于洗滌、重懸和上樣。

       預(yù)冷的洗脫/收集管。

3.  儀器與耗材：

       MACS® 分選架 和 MACS® 分選柱（根據(jù)細(xì)胞數(shù)量選擇，如 LS柱 用于最多 2x10^9 總細(xì)胞，MS柱 用于最多 10^7 總細(xì)胞）。

       移液器、冰盒等。

二、美天旎磁珠分選第二步：細(xì)胞標(biāo)記

1.  計(jì)數(shù)與離心：對單細(xì)胞懸液進(jìn)行計(jì)數(shù)，然后離心（如300-400g，5分鐘）棄去上清。

2.  重懸：用適量預(yù)冷的MACS®緩沖液重懸細(xì)胞沉淀。建議用量：每10^7 個(gè)細(xì)胞使用80-100 μL緩沖液。

3.  加入磁珠：向細(xì)胞懸液中加入推薦量的美天旎磁珠（具體體積參考產(chǎn)品說明書）。

4.  混勻與孵育：輕輕吹打混勻，在2-8°C冰箱（或冰上）中避光孵育 15-20分鐘。

       關(guān)鍵點(diǎn)：低溫孵育可減少非特異性結(jié)合和細(xì)胞吞噬，保持細(xì)胞活性。

三、美天旎磁珠分選第三步：洗滌與重懸

1.  向試管中加入10-20倍標(biāo)記體積的MACS®緩沖液。

2.  離心，棄去上清，以去除未結(jié)合的游離磁珠。

3.  用適量緩沖液重懸細(xì)胞。上樣體積取決于分選柱的容量（例如，對于LS柱，用500 μL至3 mL重懸）。

四、美天旎磁珠分選第四步：準(zhǔn)備分選柱

1.  將MACS®分選柱固定在強(qiáng)磁場中。

2.  用緩沖液潤洗分選柱（例如，LS柱用3 mL緩沖液）。讓液體自然流盡，此步驟為分選柱“預(yù)濕"。

五、美天旎磁珠分選第五步：上樣與分選

1.  上樣：將細(xì)胞懸液小心地加到分選柱中。讓細(xì)胞懸液依靠重力自然流下。不要用活塞或助推器。

2.  收集流穿液：流下來的液體即為未標(biāo)記的陰性細(xì)胞（非目標(biāo)細(xì)胞），可用收集管接收。

3.  洗滌：待細(xì)胞懸液wanquan進(jìn)入柱床后，分多次加入緩沖液洗滌（如LS柱：3次，每次3 mL）。收集所有的流穿液，這部分也是陰性細(xì)胞。

六、美天旎磁珠分選第六步：洗脫目標(biāo)細(xì)胞

1.  將分選柱移出磁場，放在一個(gè)新的收集管上。

2.  加入適量的緩沖液（如LS柱用5 mL）。

3.  立即用柱塞 迅速、有力地將緩沖液推過分選柱。這一步是將被磁場吸附的磁性標(biāo)記細(xì)胞（目標(biāo)細(xì)胞） 沖洗下來。

4.  收集到的液體就是您需要的高純度目標(biāo)細(xì)胞。

七、美天旎磁珠分選第七步：分析與后續(xù)使用

1.  可對分選得到的陽性細(xì)胞和陰性細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)和活力檢測（如臺(tái)盼藍(lán)染色）。

2.  通過流式細(xì)胞術(shù) 檢測分選純度。

3.  細(xì)胞可直接用于下游實(shí)驗(yàn)：如細(xì)胞培養(yǎng)、功能實(shí)驗(yàn)、分子生物學(xué)分析或單細(xì)胞測序。

關(guān)鍵注意事項(xiàng)

1.  保持低溫：整個(gè)操作過程盡可能在2-8°C或冰上進(jìn)行，以維持細(xì)胞活性和減少非特異性結(jié)合。

2.  避免氣泡：上樣和加緩沖液時(shí)，盡量避免產(chǎn)生氣泡，以免影響分選柱內(nèi)的流體動(dòng)力學(xué)。

3.  不要堵塞柱子：細(xì)胞懸液必須無團(tuán)塊，否則會(huì)堵塞分選柱。

4.  選擇合適的柱子：根據(jù)起始細(xì)胞總數(shù)和目標(biāo)細(xì)胞的預(yù)期頻率選擇合適型號(hào)的分選柱。寧大勿小。

5.  快速操作：洗脫步驟要迅速，一旦分選柱離開磁場，就應(yīng)立即洗脫，防止磁珠標(biāo)記的細(xì)胞因磁場消失而重新混入柱床。

6.  緩沖液：務(wù)必使用推薦的MACS®緩沖液，其他緩沖液中的Ca2+/Mg2+可能影響分選效果。

分選策略選擇

   陽性分選：直接、快速地獲取目標(biāo)細(xì)胞。如上文所述。

   陰性分選：通過去除所有不想要的細(xì)胞，間接富集目標(biāo)細(xì)胞。適用于目標(biāo)細(xì)胞沒有特異性表面標(biāo)志物，或標(biāo)志物未知的情況，也適用于不希望抗體與細(xì)胞表面受體結(jié)合影響后續(xù)功能實(shí)驗(yàn)的情況。

   去除死細(xì)胞：可以使用特定的死細(xì)胞去除試劑盒，在分選前先去除死細(xì)胞，能極大提高分選效率和純度。

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