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超濾離心管使用方法

更新時間:2025-08-12點擊次數:525

超濾離心管操作指南:3大誤區毀樣本|附分子截留/離心參數對照表

超濾回收率<50%?本文詳解Millipore/Amicon超濾管選型技巧、離心程序、防堵膜策略,提供蛋白濃縮/緩沖液置換/脫鹽全方案!附轉速-分子量計算公式+堵膜急救方案。

一、超濾管選型黃金法則(立即避坑)

需求

膜材質

截留分子量

代表產品

蛋白濃縮

再生纖維素

10kDa

Amicon® Ultra-4

病毒純化

PES

100kDa

Millipore UFC9100

核酸回收

低吸附PVDF

30kDa

Vivaspin® 20

內毒素去除

超低吸附

3kDa

Amicon® Ultra-15

>??選錯致命傷:截留分子量>目標物樣本穿透丟失!

二、操作流程(4步提升回收率至>90%

Step1預處理(防膜失效關鍵!)

1.離心管冰上預冷

2.注入1ml預冷PBS

3.1500g×5min(活化膜孔,去除甘油/乙醇)

Step2樣本加載

參數

標準值

避坑要點

最大裝載量

80%管容積

防溢出污染

樣本粘度

50cP(過高需稀釋)

粘度檢測方法:移液器吸打阻力

保留液體積

≥50μl(防干膜)

定時觀察液面

Step3離心程序(轉速/時間公式)

?離心力計算公式:

RCF(g)=0.00001118×r×(RPM)2

r=離心半徑cm

分子量-離心參數表:

截留分子量

推薦離心力

時長

3kDa

4000g

20-30min

10kDa

3500g

15-25min

50kDa

3000g

10-15min

>??防過熱技巧:4℃離心+10min暫停降溫

Step4樣本回收

-正置法:直接吸取濃縮液(回收率80-90%

-倒置法(高價值樣本):

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三、3大高頻問題急救方案

問題1:膜堵塞(流速驟降)

-處理步驟:

1.0.1MNaOH反向沖洗10min

2.超純水沖洗3

3.500g×5min低速離心疏通

 問題2:回收率低

-根因排查:

現象

原因

對策

濾液渾濁

膜破裂

更換新管(勿超速)

管壁掛液明顯

疏水吸附

預處理加 0.01% Tween-20

 

問題3:濃縮倍數不足

-科學濃縮比計算:

```

濃縮倍數=初始體積/終體積

(推薦≤10倍,防蛋白沉淀)

```

-高倍濃縮技巧:分次添加樣本(維持液面高度)

四、不同應用場景參數優化


實驗目標

關鍵參數調整

回收率

蛋白濃縮

4℃ + 3500g × 15min

92%

緩沖液置換

預裝新緩沖液 ×3

99%

脫鹽

超純水稀釋 ×5

98%

外泌體純化

100kDa + 3000g ×30min

80%




五、產品推薦

密理博millipore超濾離心管——天津益元利康生物科技有限公司,歡迎咨詢。

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