轉染試劑是分子生物學與遺傳學領域中的小幫手。在它的幫助下,科研人員可以將外源基因如DNA或RNA導入到細胞中進行轉錄與表達。然而,為了保證高轉染效率并保護細胞不受破環(huán),正確的使用和儲存轉染試劑是至關重要的。不當?shù)谋4婵赡軙е罗D染試劑的性能有所下降,從而影響實驗的準確性。本文將探討Polysciences PEI轉染試劑的保存條件、如何正確儲存該轉染試劑以及實驗中可能會遇到的問題。
一、 保存條件與正確儲存方法
正確的儲存是保證PEI轉染效率和使用壽命的基石。
1. 儲存溫度:
未滅菌的粉末或濃縮液: 應長期保存在 -20°C。這是最關鍵的一點,可以最大限度地保持其活性和穩(wěn)定性。
已過濾除菌的工作液(如1 mg/mL): 可以在4°C保存,也可以在-20°C保存。
4°C保存: 方便使用,避免了反復凍融。在4℃下可以穩(wěn)定保存數(shù)月甚至更久。
-20°C保存: 對于計劃長期儲存(超過半年)的工作液,建議分裝后存于-20°C,以保持最佳性能。
2. 分裝策略:
強烈建議進行分裝! 無論是粉末還是配制好的工作液,都應根據(jù)您的日常使用量,分裝到無菌的小管中。
目的: 避免反復凍融和細菌污染。反復凍融是導致PEI轉染效率下降和溶液出現(xiàn)沉淀的主要原因之一。
3. 溶解與配制:
粉末配制:
使用無菌的去離子水(如Milli-Q水)溶解粉末,配制成高濃度儲備液(如10 mg/mL)。
溶解時,需要用鹽酸(HCl)將pH值小心地調節(jié)至2.0左右,并加熱(如50-60°C)以幫助其wanquan溶解。
wanquan溶解后,再用NaOH將pH值回調至7.0。
最后,必須使用0.22μm的濾膜進行過濾除菌。
工作液稀釋: 將無菌的儲備液用無菌水稀釋成常用的工作液濃度(如1 mg/mL)。同樣需要確保無菌操作。
4. 穩(wěn)定性:
在正確儲存條件下(-20°C, 避免反復凍融),PEI非常穩(wěn)定,可以保存數(shù)年。
二、 實驗中可能遇到的問題及解決方案
PEI轉染的成功依賴于多個因素的精細平衡。以下是常見問題及其排查方向:
請看《PEI轉染實驗中可能遇到的問題及解決方案》
總結: Polysciences PEI是一款強大且經(jīng)濟的工具,但其成功應用依賴于正確的儲存、精確的比例優(yōu)化和標準化的操作。如果遇到問題,請從PEI/DNA比例、DNA純度、細胞狀態(tài)和復合物形成過程這幾個核心環(huán)節(jié)逐一排查。
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